大腸桿菌宿主蛋白酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒是用來(lái)定量分析以大腸桿菌為表達(dá)細(xì)胞 的生物藥物中宿主蛋白雜質(zhì)的試劑盒。首先，用不同濃度的大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)蛋白制 作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，然后再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)分析生物藥物中宿主細(xì)胞殘留蛋白的含 量。具體方法為：先將大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)蛋白或者待測(cè)樣品適當(dāng)稀釋后加入已包被好 抗大腸桿菌宿主蛋白抗體的96孔平板中。經(jīng)過(guò)1.5小時(shí)的保溫，宿主細(xì)胞蛋白與 已經(jīng)固定在平板上的抗體結(jié)合形成抗原－抗體復(fù)合物。此復(fù)合物被隨后加入的生 物素標(biāo)記的抗大腸桿菌宿主蛋白的抗體結(jié)合并進(jìn)一步形成更高級(jí)的復(fù)合物，反應(yīng) 45分鐘后洗去未結(jié)合的物質(zhì)。再加入鏈霉親合素-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物，靜置 30分鐘。因鏈霉親合素可以與任何帶生物素標(biāo)記的抗體相結(jié)合，從而使鏈霉親合 素-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物連接到平板上。接下來(lái)沖洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加入TMB 底物。固相上的酶催化底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，待顏色反應(yīng)一段時(shí)間后，終止反應(yīng)。 用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其結(jié)果，此結(jié)果能間接地反應(yīng)結(jié)合到平板上的的宿 主細(xì)胞蛋白數(shù)量的多少。根據(jù)大腸桿菌宿主蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲定量分析生物藥物中宿主 細(xì)胞殘留蛋白的含量。